Alpha Fcy受容体結合試験 - PerkinElmer Japan

AlphaLISA FCGR3A Binding Kit

Fcγ受容体(FcγR)は、イムノグロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、抗体医薬品の機能において重要な役割を果たしています。FcγRは3つのクラスFcgR1 (CD64), FcgR2 (CD32) and FcgR3 (CD16)に分類され、そのうちFcγR3は、相同性の高い2つの型FcγR3AとFcγR3Bを発現します。FcγR3Aは、多価免疫複合体IgGと低~中程度の結合性を持つ受容体であり、ファゴサイトーシスや酵素分泌、炎症性メディエーター、抗体依存性細胞傷害、マスト細胞脱顆粒、免疫複合体の排除に関与します。ヒトでは、一塩基多型により2つのアイソフォーム、1つは高結合型(176Val/V158)、もう1つは低結合型(176Phe/F158)があり、ホモ接合体の時、自己免疫疾患や治療IgG抗体への反応感受性に影響する可能性があります。FcγR3Aは、重要な治療上のターゲットと考えられています。

本キットは、ヒト IgG の Fcγ受容体に対する結合を競合法で検出するアッセイキットです。Fc と FcγR の結合試験や、高 ADCC 活性抗体のスクリーニングなどにご利用頂けます。

ストレプトアビジンドナービーズ上に結合したビオチン化 Fc 受容体(FcGR3A)と、血清由来ヒト IgG Fc 領域を結合したアクセプタービーズが近接することでシグナルを生じます。評価する IgG の Fc 受容体へのアフィニティがより強ければ、アクセプタービーズの近接を阻害し、より少ない IgG 添加量でシグナルが低下します。

 

アッセイデータ

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ヒトIgGフラグメントの FcGR3A(176Phe)に対する結合試験
2nM FcGR3A(176Phe)存在下において、Whole IgG(オレンジ)または IgG フラグメント(緑/ 紫)を添加しAlphaLISA バインディングアッセイを実施。ネガティブコントロールとして、抗ヒト FcγR3A 抗体と whole IgG を10 min プレインキュベートした物を使用(青)。Whole IgG(オレンジ)とIgG Fcフラグメント(緑)の IC50 値はそれぞれ、14.9 µg/mLと6.4 µg/mL を示した。
  ヒトIgGフラグメントの FcGR3A(176Val)に対する結合試験
0.3nM FcGR3A(176Val)存在下において、Whole IgG(オレンジ)または IgG フラグメント(緑/ 紫)を添加しAlphaLISA バインディングアッセイを実施。ネガティブコントロールとして、抗ヒト FcγR3A 抗体と whole IgG を10 min プレインキュベートした物を使用(青)。IgG Fcフラグメント(緑)とWhole IgG(オレンジ)の IC50 値はそれぞれ、5.2 µg/mLと2.3 µg/mL を示した。

 

製品名 パッケージ 製品コード
AlphaLISA
FCGR1/CD64
Binding Kit
500 assay points*
5,000 assay points*
 AL3081C
AL3081F
AlphaLISA 
FCGR2A/CD32a(167H) Binding Kit
500 assay points*
5,000 assay points*
 AL3086C
 AL3086F
AlphaLISA 
FCGR2A/CD32a(167R) Binding Kit
500 assay points*
5,000 assay points*
  AL3087C
 AL3087F
AlphaLISA 
FCGR2B/CD32b Binding Kit
500 assay points*
5,000 assay points*
AL3080C 
AL3080F
AlphaLISA
FCGR3A/CD16a (176Phe) Binding Kit
100 assay points*
500 assay points*
5,000 assay points*
AL347HV
AL347C
AL347F
Biotinylated Human FCGR3A (176Phe) 1.5 µg AL347S
AlphaLISA
FCGR3A (176Val) Binding Kit
100 assay points*
500 assay points*
5,000 assay points*
AL348HV
AL348C
AL348F
Biotinylated Human FCGR3A (176Val) 0.5 µg AL348S
AlphaLISA FcγR3B (CD16b) Binding Assay kit 500 assay points*
5,000 assay points*
AL3094C
AL3094F 
AlphaLISA FcRn Binding Assay kit 500 assay points*
5,000 assay points*
 AL3095C
AL3095F 
* 1 assay pointsは、推奨の試薬量で使用した場合の1ウェル分に相当します。