TSA 免疫組織化学染色・in situ Hybridization増感システム - PerkinElmer Japan

TSA 免疫組織化学染色・in situ Hybridization増感システム

 

Increase Imaging Detection 100X with Tyramide Signal Amplification (TSA)!

Amplify Your IHC, IF or ISH Signal with TSA Reagent Solutions ...

Why Multiplex?!

Why Multiplex?

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Signal Amplification for Immunohistochemistry

Signal Amplification for Immunohistochemistry

Improve the sensitivity of detection by 100-fold or more ... View Rapid Learning Presentation

Signal Amplification for In Situ Hybridization

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Get higher sensitivity with minimal change to your existing protocol ... View Rapid Learning Presentation

TSA Published Papers

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TSAシステム

存在量が少なく通常の方法ではしばしば検出することの困難なタンパク質や核酸であっても、チラミドシグナル増幅(TSA)技術によって、再現性のある検出や定量を行うことが可能となります。TSAシステムは、現在用いているイメージング装置や顕微鏡、サンプル調整方法はそのままで、免疫組織化学、免疫蛍光あるいはin situ ハイブリダイゼーションの検出を改善することができます。
二つのプレゼンテーション、in situ ハイブリダイゼーション(ISH)あるいは免疫組織化学・免疫細胞化学(IHC)をご覧ください。

操作ビデオ
ISH IHC

 

前立腺FFPE切片のPSA検出
TSAによる増幅
抗PSA抗体(マウス)
+ HRP標識抗マウス抗体
TSA Plus Fluorescein
蛍光標識二次抗体による検出
抗PSA抗体(マウス)
+ Alexa 488標識抗マウス抗体

 

シグナル増幅の基本原理


チラミド(Tyramide) 化合物は、過酸化水素の存在下において、西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP) の触媒作用によりラジカル化され、その近傍にある芳香属化合物と非特異的に共有結合で結びつきます。


TSAシステムではこの性質を利用し、HRP標識の抗体やプローブを用いて IHC や ISH を行った後に、ハプテン標識のチラミドを作用させます。チラミドは HRP によりラジカル化されますが、このラジカルの寿命は非常に短いため、HRPの近傍にあるサンプル組織やブロッキング剤に含まれるアミノ酸(チロシンやトリプトファン)などの芳香属化合物とのみ共有結合し、HRPの周辺にのみハプテン標識のチラミドが集積します。つまり、一つのハプテン分子を基点とし、それを拡散することなくハプテンの増幅を行うことができるのです。最後に増幅したハプテン分子を用いて、発色あるいは蛍光でシグナルを検出します。

 

TSAシステムおよびリージェントパックの構成

TSA System の各キットには、各種標識チラミドと1x アンプリフィケーション希釈液(1x Amplification Diluent)、HRP標識ストレプトアビジン、ブロッキング試薬および英文マニュアルが含まれます。リージェントパックは標識チラミドとアンプリフィケーション希釈液のみのセットになります。
パッケージサイズは、1スライドあたり100-300µLのチラミド反応液を使用した処理枚数で示されています。全ての標識チラミドは乾固されており、下表はDMSO(あるいはCyanine 3/ 5のみ精製水)で再構成後の液量を示しています。システムに含まれる1x アンプリフィケーション希釈液で50倍希釈してチラミド反応液とします。1x アンプリフィケーション希釈液(FP1052)とブロッキング試薬(FP1020)およびSA-HRP(NEL750001EA)が別途購入可能です。
この他に、必要な抗体・酵素類・発色基質など各実験系に応じて必要な試薬類は、別途準備していただく必要があります。
各種の蛍光標識チラミドを含むシステムでは、シグナル増幅をした後でそのまま蛍光を検出することができます。

製品名 製品コード パッケージ
TSA Biotin System NEL700001KT for 200-600 slides
NEL700A001KT for 50-150 slides
TSA Fluorescein System
(Ex. 494 nm, Em. 517 nm)
NEL701001KT for 100-300 slides
NEL701A001KT for 50-150 slides
TSA TMR System
(Ex. 550 nm, Em. 570 nm)
NEL702001KT for 100-300 slides
TSA Coumarin System
(Ex. 402 nm, Em. 443 nm)
NEL703001KT for 100-300 slides
TSA Cyanine 3 System
(Ex. 550 nm, Em. 570 nm)
NEL704A001KT for 50-150 slides
TSA Cyanine 5 System
(Ex. 648 nm, Em. 667 nm)
NEL705A001KT for 50-150 slides
内容
    50-150 slides 100-300 slides 200-600 slides
  標識チラミド 300µL 600µL 1.2mL
  1x アンプリフィケーション希釈液 15mL 30mL 60mL
  SA-HRP 150µL
(NEL700Aのみ2x 150µL)
2x 150µL 1.2mL
  ブロッキング剤 3g 10g 10g

Tyramide Reagent Pack

製品名 製品コード パッケージ
TSA Biotin Tyramide Reagent Pack SAT700001EA for 200-600 slides
SAT700B001EA for 1,000-3,000 slides
TSA Fluorescein Tyramide Reagent Pack SAT701001EA for 100-300 slides
SAT701B001EA for 500-1,500 slides
TSA TMR Tyramide Reagent Pack SAT702001EA for 100-300 slides
TSA Cyanine 3 Tyramide Reagent Pack SAT704A001EA for 50-150 slides
SAT704B001EA for 250-750 slides
TSA Cyanine 5 Tyramide Reagent Pack SAT705A001EA for 50-150 slides
内容
    50-150 slides 100-300 slides 200-600 slides
  標識チラミド 300µL 600µL 1.2mL
  1x アンプリフィケーション希釈液 15mL 30mL 60mL

TMR: Tetramethylrhodamine
SA-HRP: Streptavidin-Horseradhish peroxidase conjugate

 

関連製品

FP1020 TSA Blocking Reagent, 3 g
FP1052 1×Amplification diluent, 60 mL
FP1135 1×Plus Amplification diluent, 15 mL
NEL937001PK BCIP/NBT溶液, 2x 250 mL
NEL938001EA DAB溶液, 10 mL

ハプテン認識抗体

NEF832001EA Anti-DIG-HRP, 0.5 mL
NEF833001EA Anti-DIG-biotin, 0.5 mL
NEF709001PK Anti-Fluorescein-AP, 2x 250 µL
NEF710001EA Anti-Fluorescein-HRP, 2x 250 µL
FP1129 Anti-DNP(rat IgG1)-HRP, 150 µL
FP1131 Anti-DNP(rat IgG1)-AP, 150 µL
After reconstitution with water

蛍光プローブ・酵素標識プローブ

NEL720001EA Streptavidin-Fluorescein, 1 mg
NEL721001EA Streptavidin-Texas Red®, 1 mg
NEL722001EA Streptavidin-Coumarin, 1 mg
NEL750001EA Streptavidin-HRP, 2x 250 µL
NEL751001EA Streptavidin-AP, 2x 250 µL

 

標識二次抗体

製品コード番号 製品 標識 パッケージ 濃度
NEF802001EA Anti-Human IgG (goat)* HRP 1 mL 1 mg / mL
NEF803001EA Anti-Human IgG (goat) Biotin 0.5 mg 凍結乾燥品
NEF814001EA Anti-Rabbit IgG (goat) AP 1 mL 1 mg / mL
NEF812001EA Anti-Rabbit IgG (goat) HRP 1 mL 1 mg / mL
NEF813001EA Anti-Rabbit IgG (goat) Biotin 0.5 mg 凍結乾燥品
NEF824001EA Anti-Mouse IgG (goat) AP 1 mL 1 mg / mL
NEF822001EA Anti-Mouse IgG (goat) HRP 1 mL 1 mg / mL
NEF823001EA Anti-Mouse IgG (goat) Biotin 0.5 mg 凍結乾燥品

 

ハプテン標識ヌクレオチド