Scintillation Proximity Assay (SPA) - PerkinElmer Japan

Scintillation Proximity Assay (SPA)

Scintillation proximity assay(SPA)は、多様な生物学的プロセスの解析のため、放射性標識化合物と共に用いる迅速かつ高感度のホモジニアスアッセイ技術です。SPA は分離ステップを経ることがなく、オートメーション化が可能なため、ハイスループットスクリーニングに特に適しています。SPA は確立したテクノロジーで、500以上の文献に引用されています。 SPA

 

原理

放射性原子が崩壊し放出される電子の到達距離以内にSPAビーズ存在した場合のみ、SPAビーズは発光し計数が可能となります。放出電子が水中を進む距離は、そのエネルギーの強さ、つまり核種に依存しています。たとえばトリチウムでは放出される電子(β線)が蛍光物質を励起できる距離は 1.5µmしかありません。このためSPAビーズ上に結合させた受容体と標識リガンドが結合した場合のみシグナルを生じ、アッセイバッファー中に存在す標識リガンドはシグナルを生じません。このため、B/F分離操作なしに受容体結合試験を行うことができます。SAPを使った検出には3Hあるいは125I が適しますが、右表に示す核種で測定が可能です。ただし、33Pではβ 線エネルギーが高いので、バックグラウンドを下げるために洗浄操作が必要となる場合があります。

受容体結合試験の他、酵素活性側性、分子間相互作用の検出やラジオイムノアッセイなど、多岐にわたるアプリケーションがあります。
Reference
Glickman, J. F., Schmid, A. & Ferrand, S. Scintillation Proximity Assays in High-Throughput Screening. ASSAY and Drug Development Technologies. 6(3): 433-455 (2008).

ビーズ表面修飾
ビーズ種類 アプリケーション
Wheatgerm agglutinin (WGA)
GlcNAcを認識してビーズ1mgは、10-30µgの
細胞膜と結合
PVT, YSi, PS, YOx 受容体結合試験、
[35S]GTPバインディング
Polyethyleneimine (PEI) PVT, YSi, PS  受容体結合試験
Poly-L-lysine (陽イオンポリマー)
ビーズ1mgは約10µgの細胞膜と結合
YSi, PS, YOx
Membrane Binding YOx
Select-a-Beads Kit PVT & YSi or PS & YOx
Anti-mouse antibody PVT, YSi RIA、酵素アッセイ
タンパク質相互作用
Anti-sheep antibody
Anti-rabbit antibody PVT, YSi, PS
Protein A
Copper chelate (His-Tag binding) PVT, YSi 酵素アッセイ、タンパク質相互作用
Nickel chelate (His-Tag binding) PS, YOx
Glutathione (GST-Tag binding) PVT, YSi, YOx
Streptavidin PVT, YSi, PS, YOx
Silica (arginine binding) YSi NOSアッセイ
Uncoated (monophosphate binding)
YSi PDEアッセイ

 

SPA シンチレーション ビーズ

SPA シンチレーションビーズは青色光を発するシンチレータを含んでいる微小粒子です。シンチレーションカウンター(MicroBeta2、TopCount あるいは Tri-Carb)で測定ができます。
SPA シンチレーションビーズには、蛍光物質として9,10-ジフェニルアントラセンを含むポリビニルトルエン(PVT: 4.3-5.3µm, d=1.05g/cm3)あるいは、セリウムを含むケイ酸イットリウム(YSi: 体積平均径2.9µm, d=4.1g/cm3)ビーズの二種類があります。

  • PVT は沈降が穏やかなため、自動分注器によるハイスループット化に適しています。
  • YSi はPVTよりも約1.5倍計数効率が高いため、更なるカウント、感度の必要なアッセイに適しています。

SPA シンチレーション ビーズ 製品リスト

コーティング 製品 製品コード 包装
PVT YSi
WGA WGA PVT SPA Scintillation Beads RPNQ0252   100 mg
RPNQ0001   500 mg
RPNQ0060   2 g
SPQ0031   25x 500 mg
WGA YSi SPA Scintillation Beads   RPNQ0011 250 mg
  RPNQ0023 1 g
WGA PEI Type A PVT SPA Scintillation Beads* RPNQ0003   500 mg
WGA PEI Type B PVT SPA Scintillation Beads* RPNQ0004   500 mg
RPNQ0065   25x 2 g
Streptavidin Streptavidin PVT SPA Scintillation Beads RPNQ0006   50 mg
RPNQ0009   150 mg
RPNQ0007   500 mg
RPNQ0066   2 g
RPNQ0067   25x 2 g
Streptavidin YSi SPA Scintillation Beads   RPNQ0015 75 mg
  RPNQ0012 250 mg
PEI PEI PVT SPA Scintillation Beads RPNQ0097   500 mg
-
Phosphodiesterase YSi SPA Scintillation Beads   RPNQ0150 500 mg
  RPNQ0024 2 g
Poly-L-lysine Polylysine YSi SPA Scintillation Beads   RPNQ0010 1 g
Uncoated  RNA Binding YSi SPA Scintillation Beads
(interact with primary phosphate groups in nucleotides and oligonucleotides, DNA and RNA.)
  RPNQ0013 500 mg
Copper chelate Copper His-tag PVT SPA Scintillation beads (12.5 mL)
RPNQ0095   250 mg
Copper His-tag YSi SPA Scintillation beads (6.25 mL)
  RPNQ0096 125 mg
Glutathione Glutathione PVT SPA Scintillation Beads RPNQ0030   750 mg
RPNQ0028   2 g
Glutathione YSi SPA Scintillation Beads   RPNQ0033 50 mg
Anti-rabbit
antibody
Anti-rabbit PVT SPA Scintillation Beads RPNQ0016   500 mg
Anti-rabbit YSi SPA Scintillation beads   RPN140 500 mg
Anti-mouse
antibody
Anti-mouse PVT SPA Scintillation Beads RPNQ0017   500 mg
Anti-mouse YSi SPA Scintillation Beads   RPN141 500 mg
Protein A Protein A PVT SPA Scintillation Beads RPNQ0019   500 mg
Protein A YSi SPA Scintillation Beads   RPN143 500 mg
Select kit SPA Scintillation Select-a-Bead Kit
 PVT-PEI-WGA Type A
 PVT-PEI-WGA Type B
 PVT-WGA
 YSi-WGA
 YSi-Poly-L-lysine
RPNQ0250 5x 100 mg

* WGA PEI TypeAはSPAビーズ表面にWGAカップリング後、非特異的結合を下げるためPEI処理しています。WGA PEI Type BはSPAビーズをPEI処理後、WGAをカップリングしています。

 

SPA イメージング ビーズ


SPA イメージング ビーズは、赤色光を発するシンチレータを含んでいる微小粒子ですので、ViewLuxなどのCCDイメージャー で測定を行います。スクリーニングに供される化合物の中には、黄色~茶色に着色しているため青色光を吸収するものがしばしば存在します。SPA イメージング ビーズは極大発光波長が615nmですので、この吸収の影響を受けません。SPA イメージング ビーズには、ユーロピウムを含む酸化イットリウム(YOx)あるいは ポリスチレン (PS)ビーズの二種類があります。
  • YOx(平均粒径2.7µm、密度5g/cm3)は更なるカウント、感度の必要なアッセイに適しています。
  • PS は粒径2.8-3.2µm、密度が1.05g/cm3で水溶液中での沈降が緩やかなため、自動分注器によるハイスループット化に適しています。

 

SPA イメージング ビーズ 製品リスト

コーティング 製品 製品コード 包装
PS YOx
WGA WGA PS SPA Imaging Beads RPNQ0260   500 mg
WGA YOx SPA Imaging Beads   RPNQ0270 500 mg
WGA PEI Type A SPA Imaging Beads* RPNQ0287   500 mg
Streptavidin Streptavidin PS SPA Imaging Beads RPNQ0263   50 mg
RPNQ0261   500 mg
Streptavidin YOx SPA Imaging Beads   RPNQ0273 50 mg
  RPNQ0271 500 mg
PEI PEI PS SPA Imaging Beads RPNQ0098   500 mg
Poly-L-lysine Polylysine YOx SPA Imaging Beads   RPQ0328 2 g
Nickel
chelate
His-tag PS SPA Imaging Beads (5 mL)
RPNQ0266   500 mg
His-tag YOx SPA Imaging Beads (5 mL)
  RPNQ0276 500 mg
Glutathione Glutathione YOx SPA Imaging Beads   RPNQ0278 500 mg
Anti-rabbit
antibody
Anti-Rabbit PS SPA Imaging Beads RPNQ0299   500 mg
Select kit SPA Imageing Select-a-Bead Kit
 PS-WGA
 YOx-WGA
 PS-PEI-WGA-Type A
 PS-PEI-WGA-Type B
 PS-PEI
 PS-Poly-L-lysine
RPNQ0291 6x 50 mg