色の選択 - PerkinElmer Japan

マイクロプレート 色の選択

一般的に、白色プレートの方が光を反射するため、黒色プレートよりも高いシグナルが得られます。一方で、自家蛍光の影響により高いバックグラウンドが検出される場合、黒色プレートの方がバックグラウンドを消光し、S/Nが改善されます。より良い結果を得るためには、各アプリケーション、データによってマイクロプレートの色を選択する必要があります。

蛍光測定(蛍光強度/蛍光偏光/FRET):黒色プレート

半減期の短い一般的な蛍光色素(Fluorescein、cyanine 3、cyanine 5、GFP、rhodamine、Texas Red、coumarinなど)を用いた蛍光測定では、励起光照射と同時に検出を行うため、自家蛍光による高いバックグラウンドが検出されやすい傾向にあります。バックグラウンドを軽減し、より高いS/N比を検出するため、蛍光アッセイでは黒色プレートの使用を推奨しています。

時間分解蛍光共鳴エネルギー転移測定 (TR-FRET):白色プレート

蛍光寿命の長いランタノイド錯体(Europium、Samarium、Terbiumなど)を使用した時間分解蛍光測定は、励起光照射と検出に時間差をとることで、寿命の短い自家蛍光の検出を回避しています。その為、マイクロプレートは白色または黒色のどちらも選択することができます。白色プレートは、黒色プレートに比べより高いシグナルカウントが検出できます。黒色プレートは、全体のシグナルカウントは低いですが、S/Nやクロストークの問題が生じた場合に改善が期待できます。通常は、384well や 1536well プレートを用いたアッセイ、その他、シグナルが低いことが懸念されるアッセイのために、より高いシグナルが得られる白色プレートを推奨しています。

発光測定:白色 or 白灰色(AlphaPlate) or B&W(IsoPlate)プレート

発光測定では、励起光を照射しないため自家蛍光による影響がありません。特異的な発光シグナルのみが検出されるため、より高いシグナルが得られる白色プレートを推奨しています。また隣接するウェルからのクロストークを抑制するため、白灰色プレート(AlphaPlate)や黒フレームに白いカップを埋め込んだ B&W IsoPlate もお勧めです。

発光測定時のプレート比較

  vol Plate Luciferase signal Crosstalk signal Blank %Crosstalk
96 well 50 µL OptiPlate 22,701,360 3,060 80 0.01
OptiPlate 1,007,520 10 9 0.00
黒&白 B&W IsoPlate 25,462,320 140 127 0.00
384 well 20 µL OptiPlate 15,831,720 76,590 333 0.48
白灰 AlphaPlate 8,761,080 1,310 240 0.01
OptiPlate 411,400 9 13 0.00
384 well (浅底) 10 µL ProxiPlate 3,814,920 4,510 67 0.12
白灰 AlphaPlate 2,044,240 40 13 0.00
ProxiPlate 212,720 10 33 0.00
1536 well 5 µL OptiPlate 1,247,280 25,030 200 2.0
白灰 AlphaPlate 969,160 4,110 40 0.42
OptiPlate 29,520 20 13 0.02

AlphaLISA/AlphaScreen:AphaPlate(白灰色)

384-well や 1536-well など密度の高いウェルプレートを使用する場合、隣接するウェルからの光を検出するクロストークの影響を受けることがあります。黒プレートを用いることでその影響を回避することができますが、同時にシグナルが大きく減少してしまいます。AlphaPlate はクロストーク回避のために、黒プレートに代わる製品として開発された白灰色のプレートです。特にAlphaScreen やAlphaLISAアッセイを 384-well、1536-well で行う場合、AlphaPlate の使用を推奨しています。

AlphaPlateと白プレートの比較

  volume Plate High signal Crosstalk signal Blank % crosstalk
96 well 50 µL 1/2 AreaPlate 386,300 56 3 0.01
384 well 20 µL OptiPlate (白) 465,932 2,944 310 0.57
AlphaPlate 178,696 258 90 0.09
384 well (浅底) 10 µL ProxiPlate (白) 352,804 3,086 442 0.75
AlphaPlate 132,388 476 146 0.25
1536 well 5 µL OptiPlate (白) 231,395 3,294 12 1.4
AlphaPlate 147,992 570 4 0.38