LANCE/LANCE Ultra TR-FRET Assays
時間分解蛍光-蛍光共鳴エネルギー転移法
ユーロピウム（Eu）に代表されるランタニドは、通常の蛍光物質と比較して、200,000倍という非常に長い蛍光寿命を持ちます。この特徴を利用した時間分解蛍光測定では、通常の蛍光が消光した後（図1; 400msec. ）に測定を開始し、一定時間内（図1; 800msec. まで）の蛍光量の測定を行います。さらに、ストークスシフトが非常に広いため（Euの場合、励起波長 340nm, 蛍光波長 615nm）、通常の蛍光特性をもつバックグラウンドの影響を最小限に抑えることができます。
■原理
蛍光ランタニドキレートによる時間分解蛍光技術とFRET; Fluorescence Resonance Energy Transfer（蛍光共鳴エネルギー転移）技術を応用したものがLANCEです。LANCE TR-FRET は、ドナー標識（ユーロビウムキレート）とアクセプターが特異的な結合反応によりお互いに近接することにより起こります。Euキレートの励起されたエネルギーは非放射的な共鳴エネルギー転移によって、近距離にあるアクセプターにエネルギー転移をします。長時間の励起状態にある蛍光物質であるランタニドは、励起光によるアクセプターの直接励起により発生しうる短寿命の蛍光による非特異的バックグラウンドを回避することができます。LANCE TR-FRET法は、リン酸化酵素アッセイ、核内受容体およびタンパク質のバインディングアッセイなど、広く用いられています。
- LANCE Ultra
ドナーはLANCEと同様Euキレートを使用しますが、アクセプターに蛍光分子ULightを使用します。
ULightは、低分子のため、ペプチドやタンパク質を直接標識可能で、エネルギー転移距離がLANCEよりも短くなるため、より高いシグナルを得ることができます。
キナーゼアッセイでは、ULightが直接標識されたペプチドと、Eu標識抗リン酸化抗体を使用します。 - LANCE
Allophycocyanin-streptavidin (SA-APC) をアクセプターとして使用します。キナーゼアッセイでは、ビオチン標識したペプチドと、Eu標識抗体、SA-APCの複合体形成を検出します。
■特徴
- 高感度で確実なアッセイ
品質の高いデータを提供します。 - 低バックグラウンドシグナル
ストークスシフトが大きく、長波長を測定するため、着色化合物の干渉はありません。 - 偽陽性率が低い
時間分解測定により、自家蛍光の影響を受けません。 - 安定シグナル
長時間安定してシグナルを生じます。 - ウルトラハイスループット対応
自動化が容易で、サンプルの大量処理に適します。
■製品リスト
- キナーゼアッセイ
- GPCRファンクショナルアッセイ
- エピジェネティクス関連アッセイ
- LANCE General
ドナー：ユーロピウム標識抗体/ストレプトアビジン/ビオチン試薬製品名 品番 数量 Eu-W1024 labeled Anti-HA antibody AD0084/ AD0085 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 labeled Anti-6xHis antibody AD0205/ AD0110/ AD0111 10 µg/ 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 labeled Anti-c-myc antibody AD0206/ AD0114/ AD0115 10 µg/ 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 anti-GST antibody AD0252/ AD0253/ AD0254 10 µg/ 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 labeled Protein G AD0211/ AD0070/ AD0071 10 µg/ 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 labeled Anti-human IgG antibody (rabbit) AD0212/ AD0074/ AD0075 10 µg/ 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 labeled Anti-mouse IgG antibody (rabbit) AD0076/ AD0077 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 labeled Anti-rabbit IgG antibody (goat) AD0082/ AD0083 50 µg/ 1 mg Eu-W8044 labeled Streptavidin AD0060/ AD0061 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 labeled Streptavidin AD0062/ AD0063 50 µg/ 1 mg Eu-W1024 biotin CR91-100 10 nmol
アクセプター：SureLightTMアロフィコシアニン (Allophycocyanin: APC)およびULight™ アクセプターラベル製品名 品番 数量 SureLight APC-SA (Streptavidin) for kinase assay CR130-100/ CR130-150 1 mg/ 50 mg SureLight APC-SA for protein binding assay AD0201/ AD0202 1 mg/ 30 mg SureLight APC-anti-c-Myc antibody AD0059C 1 mg SureLight APC-anti-FLAG antibody AD0059F 1 mg SureLight APC-anti-GST antibody AD0059G 1 mg SureLight APC-anti-6His antibody AD0059H 1 mg SureLight APC-anti-mouse IgG antibody (goat) AD0059M 1 mg SureLight APC-anti-rabbit IgG antibody (goat) AD0059R 1 mg SureLight APC-wheat germ agglutinin AD0059W 1 mg ULight-Streptavidin TRF0102-D/ M/ R 1 nmol/ 10 nmol/ 100nmol ULight-Protein A TRF0103-D/ M 1 nmol/ 10 nmol ULight-anti GST TRF0104-D/ M/ R 1 nmol/ 10 nmol/ 100nmol ULight-anti 6xHis TRF0105-D/ M/ R 1 nmol/ 10 nmol/ 100nmol
Eu標識試薬製品名 品番 数量 Eu-W1024-ITC chelate & Eu standard AD0096/AD0013 100 µg/ 1 mg Eu-W1284-iodoacetamido chelate & Eu standard AD0107/AD0014 100 µg/ 1 mg Eu-W8044 DTA chelate & Eu standard AD0020 1 mg
バッファー、その他製品名 品番 数量 医薬用外毒物 LANCE Detection buffer, 10x conc. CR97-100 250 mL LANCE Controls AD0163 1 set
試薬に関する技術情報専用データベース（英語）
試薬関連ポスター集（英語）