LANCE/LANCE Ultra TR-FRET Assays 時間分解蛍光-蛍光共鳴エネルギー転移法 - PerkinElmer Japan

LANCE/LANCE Ultra TR-FRET Assays
時間分解蛍光-蛍光共鳴エネルギー転移法

ユーロピウム(Eu)に代表されるランタニドは、通常の蛍光物質と比較して、200,000倍という非常に長い蛍光寿命を持ちます。この特徴を利用した時間分解蛍光測定では、通常の蛍光が消光した後(図1; 400msec. )に測定を開始し、一定時間内(図1; 800msec. まで)の蛍光量の測定を行います。さらに、ストークスシフトが非常に広いため(Euの場合、励起波長 340nm, 蛍光波長 615nm)、通常の蛍光特性をもつバックグラウンドの影響を最小限に抑えることができます。

 

原理

蛍光ランタニドキレートによる時間分解蛍光技術とFRET; Fluorescence Resonance Energy Transfer(蛍光共鳴エネルギー転移)技術を応用したものがLANCEです。LANCE TR-FRET は、ドナー標識(ユーロビウムキレート)とアクセプターが特異的な結合反応によりお互いに近接することにより起こります。Euキレートの励起されたエネルギーは非放射的な共鳴エネルギー転移によって、近距離にあるアクセプターにエネルギー転移をします。長時間の励起状態にある蛍光物質であるランタニドは、励起光によるアクセプターの直接励起により発生しうる短寿命の蛍光による非特異的バックグラウンドを回避することができます。LANCE TR-FRET法は、リン酸化酵素アッセイ、核内受容体およびタンパク質のバインディングアッセイなど、広く用いられています。

  • LANCE Ultra
    ドナーはLANCEと同様Euキレートを使用しますが、アクセプターに蛍光分子ULightを使用します。
    ULightは、低分子のため、ペプチドやタンパク質を直接標識可能で、エネルギー転移距離がLANCEよりも短くなるため、より高いシグナルを得ることができます。
    キナーゼアッセイでは、ULightが直接標識されたペプチドと、Eu標識抗リン酸化抗体を使用します。
  • LANCE
    Allophycocyanin-streptavidin (SA-APC) をアクセプターとして使用します。キナーゼアッセイでは、ビオチン標識したペプチドと、Eu標識抗体、SA-APCの複合体形成を検出します。

LANCE Ultra

 

特長
  • 高感度で確実なアッセイ
    品質の高いデータを提供します。
  • 低バックグラウンドシグナル
    ストークスシフトが大きく、長波長を測定するため、着色化合物の干渉はありません。
  • 偽陽性率が低い
    時間分解測定により、自家蛍光の影響を受けません。
  • 安定シグナル
    長時間安定してシグナルを生じます。
  • ウルトラハイスループット対応
    自動化が容易で、サンプルの大量処理に適します。

 

製品リスト
  • LANCE General
ドナー:ユーロピウム標識抗体/ストレプトアビジン/ビオチン試薬
製品名 品番 数量
Eu-W1024 labeled Anti-HA antibody AD0084
AD0085 
50 µg
1 mg
Eu-W1024 labeled Anti-6xHis antibody AD0205
AD0110
AD0111
10 µg
50 µg
1 mg
Eu-W1024 labeled Anti-c-myc antibody AD0206
AD0114
AD0115
10 µg
50 µg
1 mg
Eu-W1024 anti-GST antibody AD0252
AD0253
AD0254
10 µg
50 µg
1 mg
 Eu-W1024 anti-FITC antibody  AD0270
AD0271
AD0272
10 µg
50 µg
1 mg 
 Eu-W1024 anti-FLAG antibody  AD0273
AD0274
AD0275
10 µg
50 µg
1 mg 
 Eu-W1024 anti-V5 antibody  AD0276
 AD0277
 AD0278
 10 µg
50 µg
1 mg 
 Eu-W1024 anti-Protein C tag antibody   AD0279
AD0280
AD0281
10 µg
50 µg
1 mg  
Eu-W1024 labeled Protein G AD0211
AD0070
AD0071
10 µg
50 µg
1 mg
Eu-W1024 labeled Anti-mouse IgG antibody (rabbit) AD0076
AD0077
50 µg
1 mg
Eu-W1024 labeled Anti-rabbit IgG antibody (goat) AD0082
AD0083
50 µg
1 mg
Eu-W8044 labeled Streptavidin AD0060
AD0061
50 µg
1 mg
Eu-W1024 labeled Streptavidin AD0062
AD0063
50 µg
1 mg
Eu-W1024 biotin CR91-100 10 nmol

アクセプター:SureLight™アロフィコシアニン (Allophycocyanin: APC)およびULight™ アクセプターラベル
製品名 品番 数量
SureLight APC-SA (Streptavidin) for kinase assay CR130-100
CR130-150
1 mg
50 mg
SureLight APC-SA for protein binding assay AD0201
AD0202
1 mg
30 mg
SureLight APC-anti-FLAG antibody AD0059F 1 mg
SureLight APC-anti-GST antibody AD0059G 1 mg
SureLight APC-anti-6His antibody AD0059H 1 mg
SureLight APC-anti-mouse IgG antibody (goat) AD0059M 1 mg
SureLight APC-anti-rabbit IgG antibody (goat) AD0059R 1 mg
ULight-Streptavidin TRF0102-D
TRF0102-M
TRF0102-R
1 nmol
10 nmol
100nmol
ULight-Protein A TRF0103-D
TRF0103-M
1 nmol
10 nmol
ULight-anti GST TRF0104-D
TRF0104-M
TRF0104-R
1 nmol
10 nmol
100nmol
ULight-anti 6xHis TRF0105-D
TRF0105-M
TRF0105-R
1 nmol
10 nmol
100nmol
ULight-anti-FLAG  TRF0059D
TRF0059M
TRF0059R
 1 nmol
10 nmol
100nmol
ULight-anti-FITC TRF503D
TRF503M
TRF503R
  0.2 nmol
2 nmol
20 nmol
ULight-anti-c-myc  TRF504D
TRF504M
TRF504R
 0.2 nmol
2 nmol
20 nmol
ULight-anti-V5   TRF505D
TRF505M
TRF505R
  0.2 nmol
2 nmol
20 nmol
ULight-anti-Protein C tag    TRF506D
TRF506M
TRF506R
 0.2 nmol
2 nmol
20 nmol
ULight-anti-human IgG antibody (goat)  TRF500D
TRF500M
TRF500R
0.2 nmol
2 nmol
20 nmol 
 ULight-anti-mouse IgG antibody (goat)  TRF501D
TRF501M
TRF501R
0.2 nmol
2 nmol
20 nmol
 ULight-anti-rabbit IgG antibody (mouse)  TRF502D
TRF502M
TRF502R
0.2 nmol
2 nmol
20 nmol

Eu標識試薬
製品名 品番 数量
Eu-W1024-ITC chelate & Eu standard AD0096
AD0013
100 µg
1 mg
Eu-W1284-iodoacetamido chelate & Eu standard AD0107
AD0014
100 µg
1 mg
Eu-W8044 DTA chelate & Eu standard AD0020 1 mg

バッファー、その他
製品名 品番 数量
医薬用外毒物 LANCE Detection buffer, 10x conc. CR97-100 250 mL
Ultra HiBlock Buffer, 5X  TRF1011C
TRF1011F
10 mL
100 mL 
LANCE Controls AD0163 1 set